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            企業資訊

            AMH結構及免疫活性原料介紹

            * 來源: * 作者: admin1 * 發表時間: 2018-05-09 10:59:51 * 瀏覽: 3470

            抗繆勒氏管激素(AMH),也被稱為繆勒氏管抑制因子(MIF,繆勒氏管抑制激素(MIH),繆勒氏管抑制物質(MIS),   是 140kDa,二聚體糖蛋白激素,是TGF-β超家族的一員。

            一、背景

            所有該家族的成員都是二聚體糖蛋白,在組織生長和細胞分化中起不同的調節作用。跟家族的其他成員一樣,AMH蛋白的合成首先是作為一個大的前體,包含18個信號氨基酸序列,再加工成前激素原,最終生成同型二聚體。分泌前,成熟的激素經歷糖基化和二聚體化,形成一個140kD的二聚體。二聚體由兩個完全一樣的70kD單體亞基,通過二硫鍵鏈接形成。每個單體由N端(即“pro”區)和C端(即“mature”區)組成。在細胞漿轉運過程中,70kDAMH的單體會在“pro”區和“mature”區間的特定位點水解形成兩段多肽:58kD的“pro”區和12kD的“mature”區。水解后,這兩段多肽仍會以非共價形式結合。

            二、基因及蛋白組成

            編碼AMH的基因位于19號染色的短臂上,AMH的氨基酸序列見下圖

            三、早期AMH的檢測試劑

            國外早期的AMH檢測試劑(如DSL/IOT/Beckman Gen II等),對不同形式的AMH(如天然、重組(加工過或為加工))有不同的親和力。這些試劑的抗體即可以結合單體AMH也可以結合二聚體AMH,無法對其有效辨別。DSL/IOT兩種試劑,由于使用不同的抗體及不同的校準品,在測定同一樣品時,會得出不同的檢測結果;有研究表明,Gen II的測試結果會比DSL的低20-40%;但Gen II申報數據表明,Gen II的測試結果會比DSL的高出40%。這些數據表明,AMH在某些條件下存在形式并不穩定,且測試缺乏公認的檢測標準。這在一定時間內限制了AMH在生殖評估、科研轉化等方面的應用。

            目前,國內的AMH檢測主要以Beckman Gen IIELISA結果為參考依據,如Roche cobas AMH即將檢測結果溯源至此。

            四、AMH的結構

            AMH由兩個完全一樣的70kD單體亞基,通過二硫鍵鏈接形成。每個單體由560個氨基酸排列而成。一般情況下,同型二聚體或其他低聚體的亞基是對稱排列的。盡管有些例子表明,二聚體中的對稱性是可以被破壞的。在這種情況下,一個單體上可被抗體識別的位點,在另一條單體上可能無法被識別。目前,沒有理論或機理表明,AMH是一種對稱性被破壞的二聚體。因此,識別一條單體上位點的抗體,也可以識別另一條單體上的位點。

            通過還原劑處理,二聚體AMH二硫鍵打開,AMH會形成兩條完全一致的單體。

            451氨基酸處,即—RAQRSAGA—存在水解位點,通過蛋白酶處理,全長AMH將分為兩段多肽,1-451氨基酸為“pro”區,452-560氨基酸為“mature”區。

            水解后的AMH自發聚合,可形成非共價結合的水解-再結合形式的AMH。

            移除信號肽(1-18)和7個前肽,AMH會產生2個片段,一個有26-451氨基酸;另一個有452-560氨基酸。后者為AMHmature片段。26-451還可以繼續處理為兩個片段,一個為26-229,這里稱為N-ter-pro區,另外的230-451這里稱為midpro區。

             盡管目前對于AMH在臨床相關樣本中的形式尚不明確,但是已知在哺乳動物代謝循環中可存在不同形式的AMH蛋白,在多種組織和細胞中也可確認有不同形式的AMH蛋白。

            五、AMH抗體配對選擇舉例

            AMH存在不同的形態。針對不同區域位點的抗體配對,對不同形態的AMH檢出有所不同。下圖例舉了針對不同位點的抗體

            A、B位于“pro”區,C、D位于“mature”區(A、B、C、D僅為所處區域的指示,不代表特定位點的抗體)。

            AMH是對稱性排列的二聚體,在夾心法ELISA中,同一抗體即可作為捕獲抗體用,也可作為檢測抗體用,如C-C(如無特殊說明,前者均作為捕獲抗體,后者均作為檢測抗體)這一配對可作為AMHmature-mature區檢測。由于針對同一位點,該配對的檢測不受樣本水解與否的影響。類似的,A-A可作為AMHpro-pro區檢測。C-D可作為AMHmature-mature區檢測。A-C可作為AMHpro-mature區檢測。D-B可作為AMHmature-pro區檢測。

            把每一組配對都用于試劑來測量同一樣本中AMH含量。結果如下表所示


            C-C

            A-A

            C-D

            A-C

            D-B

            Sample

            6.553

            0.369

            12.012

            23.525

            >19

            Calibrators(OD  value)

            Blank

            0.086

            0.069

            0.093

            --

            0.062

            0.1ng/ml   AMH

            0.106

            0.076

            0.133

            --

            0.08

            10ng/ml   AMH

            1.26

            1.178

            2.94

            --

            1.5

            不同配對的試劑被認為測量樣本中不同的形態的AMH。C-C測量的是全長二聚體和mature區二聚體的AMH。C-D mature-mature區檢測,測量的是全長二聚體和單體,mature區單體和二聚體AMH。因為這一配對可檢測更多形態的AMH,所以測定的值要高于C-C的檢測。A-Cpro-mature區檢測,測量全長二聚體和單體,不能被C-D識別的全長和單體的AMH片段。因此,存在有的亞型可以被pro-mature檢出,但是不能被mature-mature識別。

                       六、同仁心主要抗體的位點信息


            七、同仁心抗體的試劑符合率

            1、發光評測數據

            C9F2包被/F10G7標記

            發光物質:吖啶酯

            靶標血清:羅氏COBAS  (N=82)


            2
            、層析評測數據

            15A3包被/C9F2標記

            發光物質:銪

            靶標血清:羅氏COBAS  (N=116)

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