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        企業(yè)資訊

        25羥基維生素D生物活性原料的開(kāi)發(fā)

        * 來(lái)源: * 作者: admin1 * 發(fā)表時(shí)間: 2017-03-29 16:30:08 * 瀏覽: 3398


        項目背景

        維生素D是脂溶性類(lèi)固醇類(lèi)衍生物,主要包括VD2(麥角鈣化醇)及VD3(膽鈣化醇)。在肝臟中,維生素D被羥基化為25羥基維生素D,多與維生素D結合蛋白(VDBP)結合,進(jìn)入循環(huán)系統;25羥基維生素D是維生素D在血液中主要運輸形式,濃度高且穩定,半衰期長(cháng),其濃度被認為是評價(jià)維生素D水平的最佳指標[1]。

         

        據估計,全世界大約有30%-50%的兒童和成年人的血清25羥基維生素D缺乏,在妊娠婦女中尤為明顯[2,3]。

        原料難點(diǎn)

        25羥基維生素D作為一個(gè)臨床有廣泛需求的項目,我們在發(fā)光、免疫熒光等平臺原料的研發(fā)過(guò)程中,遇到很多的困難,主要集中在以下方面:

        l  小分子抗體的開(kāi)發(fā);

        l  25(OH)D特異性抗體的開(kāi)發(fā);

        l  兼容25(OH)D2、25(OH)D3、3-epi-25(OH)D3抗體的開(kāi)發(fā);

        l  25(OH)D2、25(OH)D3等特異性抗體的篩選;

        l  抗體原料要有足夠的定量范圍,覆蓋臨床上“不足”與“過(guò)量”;

        經(jīng)過(guò)長(cháng)期的研發(fā)工作,同仁心的研發(fā)團隊目前已成功開(kāi)發(fā)了兩組配對,基本上解決了上述各問(wèn)題。

         

        同仁心25羥基維生素D原料概況

        在化學(xué)發(fā)光、酶聯(lián)免疫、熒光紙條等免疫平臺,我們均推薦采用”競爭法”檢測本項目,根據具體檢測目標不同,我們推薦的原料組合如下:

        檢測目標

        貨號

        克隆號

        類(lèi)別

        亞型

        推薦使用

        25(OH)D

        (含D2&D3

        GD11

        BSA-25VD

        抗原

        IgG1

        包被

        GD21

        1C7

        抗體

        ——

        標記

        25(OH)D   3

        (只檢測D3

        GD12

        BSA-25VD3

        抗原

        IgG1

        包被

        GD22

        17E11

        抗體

        ——

        標記

        組合1:抗體1C7可以同時(shí)識別25(OH)D2及25(OH)D3,配套抗原BSA-25(OH)D同時(shí)偶聯(lián)了25(OH)D2及25(OH)D3,該組合模式可以用于檢測樣本中的總25(OH)D;

        組合2:抗體17E11能特異性識別25(OH)D3,不存在和25(OH)D2的交叉反應性,配套抗原BSA-25(OH)D3僅偶聯(lián)25(OH)D3,該組合可以用于特異性檢測樣本中的25(OH)D3。



        同仁心25羥基維生素D原料性能

        ?  VD2&VD3特異性競爭結果

        數據可見(jiàn),1C7對VD2和VD3都有明顯的競爭效果;17E11僅對VD3有競爭效果。

        ?  靈敏度及檢測范圍

         



        兩種組合模式,原料都可以實(shí)現3-300ng/ml范圍內的準確定量。(Roche試劑定量范圍:3-70ng/ml; Abbott試劑定量范圍:8-160ng/ml)

         

              ?  交叉反應性

        注:Roche/Abbott為試劑說(shuō)明書(shū)數據

         

        ?  對照原料的比較

        科研人員選取了市場(chǎng)上部分主要的VD抗體,連同同仁心的抗體,進(jìn)行了初步的性能評價(jià):

        在標記濃度相同的情況下,對抗體進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)芽疾炜贵w的活性:

         

         

        可見(jiàn),同仁心的抗體活性要明顯高于對照抗體。

        此外,在競爭效果相近的情況下,比較了各組抗體的使用量:

         

         

        數據可見(jiàn),競爭效果相當的情況下,同仁心抗體使用濃度更低。


        應用中的主要注意事項

        1.     體系中鹽濃度建議≤50mm;

        2.     體系中避免使用小牛、羊血清等動(dòng)物來(lái)源,組分不明物質(zhì),避免外源25OHVD或動(dòng)物其他蛋白干擾評價(jià)結果。




        參考文獻               

        [1] Holick MF Chen TC. Am J Clin Nutr 87(suppl),1080S – 1086S, 2008.

        [2] Tao M, J Maternal Fetal Neonatal Med., 2012 Mar;25(3):237-9

        [3] 《中國人群維生素D營(yíng)養狀況》,吳光馳,中國婦幼衛生雜志,2010,1(1):51-54

        [4] 《維生素D與成年人骨骼健康應用指南(2014年標準版)》,中國老年學(xué)學(xué)會(huì )骨質(zhì)疏松委員會(huì )維生素D學(xué)科組專(zhuān)家委員會(huì ):中國骨質(zhì)疏松雜志,2014

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